液相色譜儀是進行定量分析，雜質檢查等分析工作中主要的精密儀器，色譜柱是液相色譜儀的zui核心部件。在這里，介紹一下Wondasil C18 色譜柱使用中的注意事項及使用心得。

　　一、柱頭類型和不銹鋼毛細管接頭的匹配

　　Wondasil C18 色譜柱是消耗品，不是儀器原配的情況很多，如果接頭和柱頭深度匹配將會產生漏液或者死體積過大的現象。接頭比柱頭深度長，不易擰緊而漏液；接頭比柱頭深度短，柱頭內留有空隙而產生死體積，使譜帶展寬和峰拖尾。

　　二、溶劑的匹配轉換

　　Wondasil C18 色譜柱內保存溶劑和儀器系統內存留溶劑，如果和流動相不匹配，使用前需進行轉換。特別是流動村j含緩沖鹽時，如保存溶劑足純有機相或有機相比例高，直接將新柱接人使用，會導致緩沖鹽在柱內結晶析出，造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經常使用，用10％的有機溶劑保持即可。

　　三、流動相及待測樣品的過濾

　　日常分析工作中，我們使用的流動栩和待測樣品應用0．45pm濾膜過濾后再連接或注入到色譜儀上。對于有機相比例高的流動栩可以一起過濾出來備用，但是有機相比例小的流動相一定要現用現濾，分析結束時一定要先用10％的有機溶劑沖洗管路及色譜柱，為有機相少的流動相容易滋生細菌，造成色譜柱堵寒，影響色譜柱性能。

　　四、Wondasil C18 色譜柱分析時應進行平衡和老化

　　進行的方法是運行幾次完整的分析程序(包括進樣)，直到觀察到峰形、保留時間和峰面積穩定為止。對某些特定的待測物，如分子量大于1000的，閃擴散速度慢，老化時間相應要長，可采取大濃度進樣或在同一個洗脫周期內連續進樣多針的方式加快老化。

　　五、pH使用范圍

　　一般認為硅膠基質柱子的pH使用范足2-8，如果選用的是高品質硅膠，加上高密度鍵合和雙封尾，使pH耐受范同zui大提高到lO。注射用頭孢拉定流動村1pH值為8，對色譜柱傷害很大，需要選擇pH值耐受性高的色譜柱。

　　六、峰形異常

　　峰形對稱性的優劣對峰面積和分離度有很大的影響，從而影響分析結果的準確性。先檢查樣品足否過載，由于樣品過載引起的峰形后拖不能通過改變色譜條件消除。如果發現過載，需降低進樣量(包括進樣體積或濃度)，進樣量越小，峰形越好，例子如頭孢尼西鈉的測定。其次，硅醇基次級保留引起部分峰拖尾。這種情況發生，選擇高密鍵合和*的雙蜂尾工藝的色譜柱能改善峰形。另外，溶解樣品的溶劑洗脫能力比流動相強會發生峰前延，所以樣品選用流動相溶解。

　　七、Wondasil C18 色譜柱保存

　　短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩沖鹽)保存為佳，以盡量減少下次使用的平衡時間。一般只建議在長期保存反相柱的時候用純醇或乙腈，使用80％左右有機相保存也屬好的選擇，且足以避免長菌。強烈建議在柱身上貼標簽標明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱，可加0．05％化鈉溶液防止K菌。正相柱無論是短期還足長期，都推薦保存住所用流動相巾。